免疫印迹法检测人类免疫缺陷病毒

猪猪侠

HIV免疫印迹（western－blot）试验

测定方法] 免疫印迹法(或蛋白印迹法)
[方法学原理] 将纯化的确诊HIV蛋白抗原裂解，然后通过SDS-PAGE按分子量大小将其分离，再转印至硝酸纤维素薄膜上，并保存于4℃干燥试管内，测定时将割成膜条的硝酸纤维素薄膜与待检样品反应，使其充分接触。若样品中含有HIV抗体，将会与膜条上的抗原区带结合，再加上酶标抗人IgG抗体，经过与底物反应显色，即可形成肉眼可见的不同区带。
[标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．转印有HIV I型和Ⅱ型抗原的硝酸纤维素薄膜
2．酶联结合物
3．底物及底物缓冲液
4．洗涤液
5．稳定液
[测定步骤]
1．在免疫印迹法反应槽内，加入3ml洗涤液。加入待测样品ul，混匀。
2．在反应槽内加入含HIV抗原的硝酸纤维素薄膜液，在室温环境中振摇2h，每份样品为l条。每次测定需附阴性对照、阳性对照。在振摇过程中，应使膜条带有号码的一面始终保持向上。
3．倾去槽内的反应液，用洗涤液将各膜条洗5次，每次3min。
4．在各反应槽内加酶联试剂，于室温环境中再振摇lh，用洗涤液洗4次，最后用底物缓冲液洗1次。
5．将底物溶液配好后，加入反应槽内并振摇数分钟，待阳性对照出现典型的HIV抗体阳性区带后，迅速倾去底物溶液，并加入稳定液继续振摇30min。然后将膜条取出，避光晾干，判断结果。
6．结果判断：确认试验的结果判定可根据世界卫生组织推荐的标准，即阳性至少1条env带和1条pol带；或至少1条env带和1条、gag带；或至少1条env带、1条gag带和1条pol带；或至少2条env带；阴性：无病毒特异带。可疑：1条gag带和1条pol带，或只有gag带或poi带。
[临床意义] 免疫印迹法是目前公认的确诊HIV感染的方法，若检出3个HIV主要基因(gag、poi、env)产物的抗体为阳性时，可确诊为HIV感染。